STR鑒定

細(xì)胞系錯(cuò)誤鑒定問題已有50年歷史，基于國際細(xì)胞庫的分析數(shù)據(jù)顯示：1984年細(xì)胞錯(cuò)誤鑒定率為35%，1999年為18%，直到最近幾年，應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的細(xì)胞系需要鑒定的問題仍然很少有人關(guān)注。咨詢電話:13816144967(微信同號)

STR（Short Tandem Repeat，短串聯(lián)重復(fù)序列）是一類廣泛存在于真核生物基因組中的DNA串聯(lián)重復(fù)序列，其核心序列重復(fù)次數(shù)存在個(gè)體差異多態(tài)性，因此STR也被稱為細(xì)胞的DNA指紋。

近年來，大量研究表明STR基因分型方法是進(jìn)行細(xì)胞交叉污染和性質(zhì)鑒定的最有效和準(zhǔn)確的方法之一，STR基因分型應(yīng)用于細(xì)胞鑒定已被ATCC等機(jī)構(gòu)強(qiáng)烈推薦。美國的ATCC細(xì)胞庫、德國的DSMZ細(xì)胞庫以及日本的JCRB細(xì)胞庫等為STR分型提供了各細(xì)胞株的數(shù)據(jù)供比對。越來越多的雜志在投稿時(shí)要求撰稿人提供細(xì)胞STR分析數(shù)據(jù)，STR已被ATCC等機(jī)構(gòu)作為細(xì)胞鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。

鑒定方法：

STR基因位點(diǎn)由長度為3～7個(gè)堿基對的短串連重復(fù)序列組成，可通過PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）來檢測。STR基因座位上的等位基因可通過擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)重復(fù)序列的拷貝數(shù)的不同來區(qū)分，在毛細(xì)管電泳分離之后可通過熒光檢測來識別。隨后通過一定的計(jì)算方法，即可根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與專業(yè)的細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫比對從而推算出樣品所屬的細(xì)胞系或可能的交叉污染的細(xì)胞系名稱。咨詢電話:13816144967(微信同號)

什么時(shí)候需要細(xì)胞系STR鑒定？

? 發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費(fèi)前；

? 使用細(xì)胞進(jìn)行臨床治療（試驗(yàn)）前；

? 準(zhǔn)備凍存保種或已凍存多年的細(xì)胞；

? 一個(gè)涉及到細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開始/結(jié)束時(shí)；

? 新得到的細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)室培養(yǎng)5代以上的細(xì)胞；

? 細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大；

? 異體細(xì)胞移植后嵌合情況檢查。

這樣將避免由于細(xì)胞系交叉污染或身份誤認(rèn)，導(dǎo)致的金錢、時(shí)間的浪費(fèi)和無效實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的產(chǎn)生。

樣品要求：

活細(xì)胞：T25培養(yǎng)瓶，60%-70%密度，細(xì)胞數(shù)>106個(gè)，寄出前灌滿培養(yǎng)基封口膜密封蓋子，常溫運(yùn)輸。

細(xì)胞沉淀/凍存細(xì)胞：細(xì)胞數(shù)量需≥106，干冰運(yùn)輸。

DNA樣本：OD260/OD280=1.8~2.0，DNA濃度≥50ng/uL，DNA體積≥20uL。咨詢電話:13816144967(微信同號)