腸道病毒滅活檢測

EV71是人腸道病毒的一種，是引起嬰幼兒HFMD主要病原體之一。由于該病毒具有脊髓前角神經(jīng)組織嗜性,因而可以引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染(無菌性腦炎和腦膜炎、脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹)。

EV71為單股正鏈RNA病毒，屬于小RNA病毒目小RNA病毒科腸道病毒屬，基因組全長大約7500個(gè)堿基，僅有一個(gè)開放讀碼框架，編碼一-個(gè)多聚蛋白，這一多聚蛋白經(jīng)進(jìn)一步水解剪切后產(chǎn)生病毒的4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(VP1-VP4)和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(2A-2C 和3A-3D)，兩側(cè)為5'和3'非編碼區(qū)(UTRs)。咨詢電話：13816144967（微信同號）

EV71滅活疫苗（人二倍體細(xì)胞）滅活工藝驗(yàn)證

目的：

對腸道病毒71型（enterovirus 71,EV71）滅活疫苗（人二倍體細(xì)胞）的滅活工藝進(jìn)行驗(yàn)證。

方法：

取3批次經(jīng)甲醛滅活的EV71滅活病毒收獲液樣品,分別連續(xù)盲傳4代,并設(shè)病毒對照盲傳4代。觀察每代次樣品的細(xì)胞病變情況,采用微量滴定法檢測病毒感染性滴度,ELISA法檢測EV71特異抗原含量,實(shí)時(shí)定量PCR法檢測病毒核酸水平及病毒負(fù)鏈產(chǎn)生情況。

結(jié)果：

3批滅活的疫苗病毒收獲液樣品經(jīng)4次盲傳后,各代次均未出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變,經(jīng)微量滴定法均未檢測到EV71感染性滴度。滅活的病毒收獲液盲傳至第2代時(shí),病毒負(fù)鏈檢測已為陰性;至第3代時(shí),EV71抗原檢測為陰性;至第4代時(shí),病毒核酸檢測為陰性。病毒對照經(jīng)盲傳4代后,各代次均出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變;自第2代開始,感染性滴度維持在106~107 CCID50/ml,抗原含量為200~370 U/ml,且均可檢測出明顯的病毒核酸及病毒負(fù)鏈增殖。

結(jié)論通過經(jīng)典的＂細(xì)胞上盲傳3代＂的檢測方法,并結(jié)合實(shí)時(shí)定量RT-PCR對病毒核酸和負(fù)鏈進(jìn)行檢測,證實(shí)經(jīng)甲醛滅活的EV71滅活疫苗樣品已完全滅活。

EV71 滅活疫苗具有良好的免疫原性

接種EV71滅活疫苗可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗EV71的免疫力，用于預(yù)防EV71感染所致的 手足口病。EV71滅活疫苗接種后28天，血清抗體陽轉(zhuǎn)率為88.1%～100%。目前關(guān)于EV71疫苗免疫持久性研究數(shù)據(jù)有限，根據(jù)對Ⅲ期臨床研究對象的跟蹤觀察，接種后56天至8個(gè)月，EV71中和抗體滴度有所下降，8～14個(gè)月抗體水平處于相對穩(wěn)定狀態(tài)，但抗體陽性率未見下降。免疫后兩年的觀察結(jié)果顯示，中和抗體水平和臨床保護(hù)效力仍然維持在較高水平。接種2劑次EV71滅活疫苗對于EV71感染相關(guān) 手足口病的保護(hù)效力為90%～97.45%，對于EV71引起的相關(guān)疾病的保護(hù)效力為80.4%～88.0%。對柯薩奇病毒A16型（CV A16）和其他腸道病毒感染 手足口病無保護(hù)效力。不同基因型毒株的免疫原性研究結(jié)果顯示，疫苗株對EV71不同基因型和亞型具有交叉保護(hù)作用。咨詢電話：13816144967（微信同號）