新冠病毒滅活試驗(yàn)方法

新冠病毒滅活試驗(yàn)原理，是用細(xì)胞感染法測定消毒因子作用前后（或?qū)φ战M與實(shí)驗(yàn)組）樣本中病毒的量。以細(xì)胞病變作為判斷指標(biāo)，確定各組病毒的感染滴度，觀察消毒因子對新型冠狀病毒的滅活效果。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)

1、懸液法病毒滅活試驗(yàn)

a) 取待測消毒劑，用滅菌硬水稀釋至所需濃度的 1.25 倍，于 20 ℃±1 ℃水浴中備用。

b) 病毒懸液的制備：取出-80 ℃低溫保存的新型冠狀病毒，室溫解凍后，與有機(jī)干擾物按照 1:1 比例混合作為消毒劑滅活試驗(yàn)用病毒懸液。

c) 消毒試驗(yàn)：取上述病毒懸液1份加入4份待檢消毒劑，立即混勻并記時。作用至規(guī)定時間，立即取出 0.1 mL，加入經(jīng)鑒定合格的 0.9 mL 中和劑中混勻；或用經(jīng)鑒定合格的除藥方法處理。

d) 對照組試驗(yàn)：陽性對照組為病毒對照組，觀察病毒生長是否良好，病毒滴度是否達(dá)到試驗(yàn)要求；陰性對照組用細(xì)胞維持液作為陰性對照，觀察有無污染，細(xì)胞生長是否良好。

e) 以上各組按照終點(diǎn)稀釋法分別進(jìn)行病毒滴度測定。試驗(yàn)重復(fù) 3 次。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)

f) 終點(diǎn)稀釋法：用細(xì)胞維持液對待滴定樣本做 10 倍系列稀釋，吸取樣液 100 μL，接種于單層細(xì)胞培養(yǎng)板上，每個滴度接種 4 孔。在 36 ℃±1 ℃放置 1 h～2 h 后，取出培養(yǎng)板，更換細(xì)胞維持液。繼續(xù)放入二氧化碳培養(yǎng)箱中（36 ℃±1 ℃,5%±1% 二氧化碳）培養(yǎng) 3-4 天，顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，記錄細(xì)胞病變情況。

2、載體法病毒滅活試驗(yàn)

a) 取待測消毒劑，置于 20 ℃±1 ℃水浴中備用。

b) 病毒載體的制備：取滅菌載體片，滴染新型冠狀病毒晾干備用。

c) 消毒試驗(yàn)：取病毒載體置于消毒因子，作用至規(guī)定的時間后取出放入經(jīng)鑒定合格的中和劑或洗脫液 1.0 mL 中，作用 10 min,混勻洗脫。消毒器械載體布點(diǎn)應(yīng)置于最難殺滅部位，具體方法參照《消毒技術(shù)規(guī)范》。

d) 對照組試驗(yàn)：陽性對照組為病毒對照組，觀察病毒生長是否良好，病毒滴度是否達(dá)到試驗(yàn)要求；陰性對照組用細(xì)胞維持液作為陰性對照，觀察有無污染，細(xì)胞生長是否良好。

e) 以上各組按照終點(diǎn)稀釋法分別進(jìn)行病毒滴度測定。試驗(yàn)重復(fù) 3 次。

f) 終點(diǎn)稀釋法：用細(xì)胞維持液對待滴定樣本做 10 倍系列稀釋，吸取樣液 100 μL，接種于單層細(xì)胞培養(yǎng)板上，每個滴度接種 4 孔。在 36 ℃±1 ℃放置 1 h～2 h 后，取出培養(yǎng)板，更換細(xì)胞維持液。繼續(xù)二氧化碳培養(yǎng)箱中（36 ℃±1 ℃,5%±1% 二氧化碳）培養(yǎng) 3-4 天，顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，記錄細(xì)胞病變情況。

新冠病毒滅活試驗(yàn)：結(jié)果評價

同時符合下列a)和b)的消毒因子判為消毒效果合格：

a) 去除殘留消毒劑效果的中和劑鑒定試驗(yàn)合格；

b) 懸液滅活試驗(yàn)，每次試驗(yàn)對新型冠狀病毒應(yīng)有效滅活，陽性對照組病毒滴度對數(shù)值應(yīng)≥5.0或載體滅活試驗(yàn)，每次試驗(yàn)對新型冠狀病毒應(yīng)有效滅活，陽性對照組病毒滴度對數(shù)值應(yīng)≥4.0。咨詢電話: 13816144967 (微信同號)